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原核表达系统

      原核表达系统是通过原核生物来获得外源蛋白的体系,也是最常用的蛋白表达体系之一,相比哺乳动物蛋白表达系统,其成本更低,操作也更简单。肽谷生物可以提供的原核表达系统服务包括:可溶性蛋白表达服务、内毒素检测服务等。

  • 可溶性蛋白表达服务

          肽谷生物可溶性蛋白表达采用大肠杆菌(E.coli)表达系统进行重组蛋白生产,您只需要提供目标蛋白序列或其对应的基因序列,肽谷生物会按照合同约定的量及纯度进行交付。

    服务流程与项目

    内容

    周期

    1.基因合成

    密码子优化与基因合成

    1-2周

    2.载体构建

    克隆至表达载体(质粒)

    质粒测序

             

    大量质粒制备

    2-3周

    3.表达评估

    转化适合菌株

    小量发酵培养

    SDS-PAGE检测
    评估蛋白表达情况

    1-2周

    4.蛋白表达及纯化

    根据表达评估进行发酵

    蛋白纯化

    SDS-PAGE检测,UV分析

    2-3周

    交付内容:

    基因构建测序报告;


    表达评估及可行性报告;


    纯化蛋白;


    SDS-PAGE报告及实验报告。


  • 内毒素检测

          肽谷生物提供内毒素检测服务。内毒素(endoroxin)是革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌E.coli)细胞壁中的一种成分,叫做脂多糖(LPS)。大肠杆菌在重组蛋白表达过程中,会产生大量内毒素。内毒素是一种热源,会导致生物体炎症发热反应,所以使用重组蛋白于动物实验时,内毒素的检测就很有必要。

    常用实验对内毒素的要求如下表:

    重组蛋白应用实验

    对内毒素的要求

    体外酶活实验

    无影响

    蛋白抗原、制备抗原

    无影响

    体外细胞分化培养

    要求低内毒素<1EU/ug

    其他动物体内实验

    要求低内毒素

    内毒素检测方法:

        内毒素的检测方法有半定量的凝胶法检测和绝对定量的显色法。目前国际上最精确的是基于鲎试剂的显色法和凝胶法。

    内毒素的一般水平与药用标准:

    应用领域

    内毒素一般水平与标准

    大肠杆菌

    100万 EU/ml

    自来水

    10-100 EU/ml

    生物制药

    <0.01 EU/ml

    髓鞘内注射药

    0.2 EU/kg

    非髓鞘内注射药

    <5 EU/kg

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